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內細胞的培養
點擊次數:1112 發布時間:2015-07-17
 



 1. 瘤細胞懸液接種
(1)無菌選取生長良好瘤組織或對數生長期培養瘤細胞。    
(2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨,經80~100目篩網過濾成細胞懸液。
(3)培養細胞應用PBS洗兩遍。
(4)計數并調整細胞濃度107~108/ml。
(5)常規消毒后,于接種部位用醫用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液。初次接種成功率低,細胞數盡可能多一些。
(6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期,以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,后固定為一個相對穩定的時間。
2. 腹水瘤的建立與腹水瘤的接種 
將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤細胞,將這種腹水反復傳代,即可成為腹水瘤。初次傳代時,腹水常呈血性,反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。
(1)將凍存或培養的腹水瘤細胞離心和洗滌,進行 細胞計數 。
(2)消毒動物,左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞。
(3)接種腹水瘤細胞后約7~12d,待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9號針頭抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
(4)抽取的腹水經3000rpm離心15min,收集上清,分裝凍存備用。

 
 
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